流行的核酸提取方法

核酸提取纯化 是测序、RT-PCR 扩增、杂交、克隆和生物检测等下游应用的首要步骤。确保分子诊断测试和分子生物学研究的可靠结果至关重要。

通常，我们从各种成分复杂的样品中分离核酸有 3 个目的。

1. 去除会干扰下游过程的抑制剂。

2. 增加目标核酸浓度以优化检测性能

3. 提高样品均一性，确保可靠的检测结果

核酸的分离分离方法

液相和固相分离：

传统的液相萃取涉及沉淀和离心等步骤。液相萃取复杂、耗时且劳动强度大。固相萃取是利用固相吸附性载体与核酸结合，使蛋白质、脂类等杂质留在液相中，作为上清液去除。

固相分离方法 更受欢迎，因为它们提供有效的相分离，污染风险低，并且需要更少的样品量。最常用的固相萃取技术是 离心柱 和 基于磁珠 萃取。

基于离心柱的方法

最常见的离心柱使用选择性结合核酸的硅胶膜。二氧化硅膜离心柱采用以下步骤；

步骤1 裂解：要破坏细胞，请使用 旋涡混合器.经过高效反应后，核酸与蛋白质和其他杂质分离。

第2步 孵化: 将混合物放入 孵化器 在那里蛋白质将被消化和溶解，同时进一步释放核酸。

步骤 3 捆绑：然后将裂解的样品与结合溶液一起转移到离心柱并离心。这迫使溶液通过柱内的硅胶膜。核酸被硅胶膜截留，而剩余的溶液则通过它。

步骤4 Washing：加入洗涤缓冲液并再次离心。这有助于洗掉细胞碎片和不需要的蛋白质等杂质。

步骤 5 洗脱: 风干后，加入洗脱缓冲液以使用硅胶柱分离 DNA 离心机 再次。

从以上步骤可以看出，涉及频繁的液体处理，整个过程费时费力，需要反复使用涡旋混合器和离心机等实验室设备。因此，离心柱方法更适合实验室中的低通量应用。

磁珠法

基于磁珠的方法广泛应用于 自动核酸提取仪 连同包含裂解、洗涤和洗脱缓冲液的试剂盒。以下是自动化磁珠提取常用的步骤：

步骤1 样品加载：首先，将样品、磁珠和各种缓冲液装入96孔深孔板的特定孔中。

第2步 裂解和结合： 细胞在加热下裂解，并使用磁棒套筒梳反复搅拌。释放的核酸与磁珠结合。磁棒下降以收集磁珠并将其与结合的颗粒转移到下一个孔中进行清洗。

步骤 3 洗涤： 洗涤孔中的酒精洗涤缓冲液有助于去除污染物。使用磁棒收集洗过的珠子后，将其放在孔上方一段时间以在洗脱阶段之前去除酒精。

步骤4 洗脱： 去除酒精后，将磁珠转移到装有洗脱缓冲液的孔中。然后释放结合的核酸，收集并去除磁珠。然后可以从洗脱孔中收集纯核酸提取物。

基于磁珠的自动化核酸提取集混合、结合、洗涤和洗脱于一体，提供高效、高质量的提取，适用于需要高通量和短时间高产量的检测。市场上最常用的高通量核酸提取仪可提供 32 个样本的最大通量（如 多Ex032) 或 96 个样本（如 多Ex096).

如果您的应用不需要自动高通量核酸提取，并且您想要更便宜的基于磁珠的提取工具， 磁力架s 对你来说是个不错的选择。

这是工作原理。核酸与磁珠结合后，磁力架开始发挥作用。将试管放入磁力架后，珠子和结合的核酸会磁性吸附在壁的一侧。这使得使用 吸管.在洗脱步骤中，磁铁再次吸住磁珠，从而分离出高质量的核酸并转移到干净的试管中。

磁力架是一种经济、快速的核酸提取方法，无需离心。

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